細菌內(nèi)毒素檢查法（BET）是利用鱟試劑來檢測供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法，擁有操作簡單、靈敏度高、專屬性強、試驗結(jié)果易判斷等優(yōu)點， 因而被廣泛應用于藥品、醫(yī)療器械、臨床醫(yī)學研究，各種水源、食品、動物飼料等方面的體外內(nèi)毒素檢查。BET的反應機理是一系列的酶促反應，任何影響反應機制因素的干擾，都會導致檢查結(jié)果的異常。特別是近些年生物醫(yī)藥的樣本組分越發(fā)復雜，對去除內(nèi)毒素檢測干擾提出更大的挑戰(zhàn)。

廈門鱟生科·BIOENDO給大家整理了以下檢測樣本時可能產(chǎn)生干擾的因素都有哪些：

環(huán)境內(nèi)毒素無處不在，操作環(huán)境及操作不當可使在操作過程中帶來污染，所用器具處理不當，被外來的內(nèi)毒素污染，都很容易導致假陽性結(jié)果。因此BET應在符合規(guī)定的凈化間或操作臺進行，盡量防止外源性內(nèi)毒素的污染。所用器材應清洗干凈，用酸、堿洗液或洗滌劑清洗后, 應反復沖洗干凈，避免殘留的內(nèi)毒素。如玻璃容器須在250℃干熱滅活至少30min。采樣用注射器及吸管應有良好的精密度，玻璃容器材質(zhì)應選用耐酸、堿的硬質(zhì)玻璃，膠管、膠塞應使用優(yōu)質(zhì)醫(yī)用產(chǎn)品。實驗所接觸的器皿耗材均要無內(nèi)毒素，以避免外源引入污染。操作人員在試驗過程中勿大聲講話和急速行動，防止塵埃和唾液濺入檢品中。

供試品的種類不同，對于BET的干擾因素不同，下面列舉了幾種常見的干擾因素及其解決方式。

二價陽離子：二價陽離子濃度不足(如Mg²⁺離子)，內(nèi)毒素無法激活鱟試劑中的酶，反應被抑制。可通過使用鈣鎂離子添加劑（BY01）解決，注意過高的二價陽離子（如Ca²⁺）濃度可能會對試驗帶來抑制作用。

高滲透壓：較高濃度的糖或鹽通常會抑制BET，可使用BET水在允許范圍內(nèi)進行稀釋消除干擾。

酶、酶抑制劑：供試品若含有絲氨酸蛋白酶會增強反應，若含有絲氨酸蛋白酶抑制劑會抑制反應。通常的消除干擾的方式為：使用BET水或廠家提供的樣本處理液（ST09）稀釋10倍，然后75℃加熱10分鐘，冷卻至室溫后再檢測。

非內(nèi)毒素反應物：β-葡聚糖會造成實驗結(jié)果假陽性，可使用G因子抑制劑（BT02）消除干擾。或使用內(nèi)毒素檢測試驗進行檢測。

洗滌劑：高濃度的洗滌劑會使鱟試劑的蛋白失活，可對供試品進行稀釋降低干擾。

油脂類：脂類包裹內(nèi)毒素，使內(nèi)毒素無法暴露出來，實驗結(jié)果將出現(xiàn)假陰性，可通過添加分散劑（PBS50）的方式去除干擾。

一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內(nèi)為宜，pH值過高或過低，均可抑制鱟試劑與內(nèi)毒素的反應， 使鱟試劑靈敏度下降。可以通過酸堿緩沖液（BH02）調(diào)節(jié)供試品的pH值，使其處于最佳的pH范圍。

《中國藥典》規(guī)定鱟試驗反應溫度在37±1℃，凝膠法試驗需要注意溫育時間60±2min。溫度過低，凝膠化推遲，溫度過高則破壞鱟試劑，阻止凝膠反應；延長溫育時間， 則提高了鱟試劑的靈敏度，易出現(xiàn)假陽性。光度法、重組C因子熒光法、重組級聯(lián)試劑顯色法(RCR0428)需要注意檢測設備（鱟試驗微生物快速檢測系統(tǒng)ELx808IU-SN）溫控性能。

凝膠法試驗在溫育過程和取放安瓿時要小心避免振動造成假陰性。

BET結(jié)果會受多種因素的干擾，造成結(jié)果異常。我們在實驗過程中，應按藥典規(guī)定的操作規(guī)程、實驗條件、廠家專業(yè)培訓指導，排除各種干擾因素，保證實驗結(jié)果準確可靠。

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